如何做好生物制藥公司的滅菌設備驗證

一、 法規要求

GMP指南（無菌藥品）

GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術要求自動控制型

藥品生產驗證指南2003

二、 內容

1.GMP指南（無菌藥品）

博維-狄克實驗（BD實驗）、氣密性實驗、空載熱分布測試、滿載熱分布和熱穿透實驗、微生物挑戰性實驗、呼吸器的評估、在驗證等。

2.GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術要求-自動控制型

蒸汽滲透（BD實驗）、橡膠負載的滅菌效果、溫度參數、滿負載溫度、真空泄露。

3.藥品生產驗證指南2003

概況、生物指示劑選用、F0值選擇、空載狀態熱分布、裝載熱穿透實驗、生物指示劑驗證。

三、 標準

1.GMP指南（無菌藥品）

1.1博維-狄克實驗（BD實驗）

內部指示卡色條呈現均勻變色

1.2氣密性實驗

不應超出1.3kPa/10min

1.3空載熱分布測試

無硬性標準，考察設備本身性能變化滿載熱分布與空載熱分布相同：同一時刻各點之間的差值應不超過2度。

1.4滿載熱分布和熱穿透實驗

F0值大于12。

1.5微生物挑戰性實驗

滅菌程序可以實現10-6的存活概率。

2.GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術要求-自動控制型

2.1蒸汽滲透（BD實驗）

變色均勻

2.2橡膠負載的滅菌效果

生物指示劑不再具有生物活性，陽性對照具有生物活性。

2.3溫度參數

滅菌溫度為下限，上限為+3度。

2.4真空泄露

壓力上升速度不應超過0.13kPa/min。

3.藥品生產驗證指南2003

3.1空載狀態熱分布

各測溫點間的溫差允許在±1度之內。

3.2氣密性實驗

抽真空使內室壓力為7kPa（或以下）關閉全部連接閥門，記錄時間與壓力，等待300秒，但不得超過600秒，讓滅菌器冷凝水汽化，然后記錄時間與壓力，600秒±10秒，再記錄一次，計算600秒內的升壓速率。

4.空載熱分布測試

至少10個探頭（較大15-20），幾何中心和角落代表性，溫度傳感器及冷凝水放口放置，需進行3次測試。

5.滿載熱分布和熱穿透實驗

進行3次測試，明確裝載布置圖。

6.微生物挑戰性實驗

指示劑位置應靠近溫度探頭的位置

7.呼吸器的評估完整性測試

8.再驗證

通常為12個月

再驗證監控運行數據的資料回顧，以證明滅菌程序無偏離趨勢

這里說明下，再驗證涉及到的新名詞：工藝標準和工藝執行標準，后面會進行詳解。

四、空腔負載實驗

藥品生產驗證指南2003

概況：對設備結構，功能與操作進行描述

生物指示劑選用121度濕熱滅菌采用嗜熱脂肪芽孢桿菌

F0值選擇過度熱殺F0值12；殘存概率F0值8，一般F0值12屬于有效殺滅。

空載狀態熱分布冷凝水排放口（一般冷點）放置一個熱電偶，運行3次。

裝載熱穿透實驗確定裝載方式下冷點，在最大和最小裝載下分別進行。

生物指示劑驗證同GMP指南，提及滅菌前生物負荷檢查中未檢出耐熱孢子。

五、驗證流程

驗證前的URS(用戶需求標準）-FDS（功能標準）-DQ（設計確定）FAT（工程測試）IQ-OQ-PQ（安裝-運行-性能確認）就不多說了，這是標準流程一個不能少。

以上標準流程做完后才是真正滅菌柜驗證的開始。

這里有個重點要畫下來，考試要考的，就是偏差管理，變更控制。

5.1工藝標準與工藝執行標準

每一種產品為了達到有效的滅菌，最后設定的標準不一定就是工藝標準，在這里在引進個說法叫工藝執行標準。

工藝執行標準是為了達到工藝標準而根據產品情況和設備情況經驗證得來的執行標準。

這里要說明的是我們滅菌的實現是工藝標準當中定的，這個是變不了的。舉個例子來說比如說115度，30分鐘或者121度15分鐘，這個是不能變的，這是工藝標準。我們為了這個工藝標準，根據我們產品特性和設備情況所做的結果，也就是說驗證出來的結果，我們設定的值，這個叫工藝執行標準。為了達到115度30分鐘的工藝滅菌標準經驗證得出我們需要在設備上設定115度32分鐘才能使滅菌器腔體內所有的點都滿足工藝標準，因此在實際執行中我們設定的滅菌器標準是115度32分鐘。

就像剛才舉的例子，只有在操作規程中說明按照工藝執行標準來進行操作，才能達到我們工藝標準的要求。工藝標準和工藝執行標準，這是兩個概念。

工藝執行標準是為了達到工藝標準，而設定的一個標準，是我們實際操作的寫入SOP中的。但不是工藝規程和STP當中的內容。

工藝執行標準是會變化的，所以再驗證就很主要了。要按時進行在驗證或者根據設備及產品的情況進行再驗證

而且工藝執行標準是個變值，它會根據我們產品的不同以及我們設備連續使用的情況，或者使用年限而進行一定量的變更或者是變化的，甚至包括我們設備更換零配件也會對工藝執行標準產生一定影響。

5.2BD試驗

在性能確認中：BD測試目的為了測試冷空氣排放效果，而冷空氣的存在主要影響有兩個：一是純蒸汽參雜冷空氣影響熱穿透效果。二是滅菌器內水分降低，影響殺滅效果。驗證進行BD測試，證明其設計無誤，再驗證無需進行。

5.3冷點位置

空載熱分布確定冷點位置，滅菌過程始終高于121度，計算極差值。

由于我們的這個基礎架構能力和材料能力越來越好，對于現在的滅菌柜，這個冷點位置和以前會有不同，但這個冷水凝結的地方一定會對我們滅菌效果產生影響，而且冷水凝結的地方，一般的情況下是不會變的。

5.4裝載方式

滿載確定滿載量及擺放方式，作為日常負載依據。在滅菌的時候，如非必要千萬不要變更擺放方式。一旦變更擺放方式之后，我們一定要重新做驗證。因為在擺放邊方式變更的時候，絕對會對我們滿載熱穿透有很大的影響。

5.5生物指示劑試驗

確認預定的滅菌程序能夠在產品滅菌后，微生物存活率＜10-6。

5.6脈動真空滅菌柜空載探頭布點原則

實際的探頭數量和布點位置只有一個目的，保證取樣點的代表性，能夠反饋出測試目標的性能。

GMP指南內容

至少10個探頭（較大15-20），幾何中心和角落代表性，溫度傳感器及冷凝水排放口放置。

5.7再驗證周期

1.儀表校正應每季度進行一次，或根據內部有關校驗周期的規定進行校驗。

2.微生物標定物試驗應每季度進行一次。

3.熱分布試驗應每年進行一次。

任何重大變更（改變裝載狀態，改變滅菌時間等）或重大維修完成后，均要進行驗證，以證明不同變更對已驗證的滅菌系統的滅菌效果沒有不良影響。

實際使用中可以根據自己品種及設備的情況制定相關要求

數據的匯總和分析也是比較重要的環節，更主要的是重現性！

最后給大家個公式有興趣的可以手動計算F0值，，計算公式：F0=ΔtΣ10(T－121)/10

公司背景介紹：

澤恒.華譜在計量校準、驗證與確認的優勢是專注做生物制藥質控服務，針對一些特殊的儀器都非常熟悉，核心團隊來源于制藥公司和儀器廠家，對儀器和GMP法規都很熟悉，比如：我們團隊專門研發了替代進口的熒光定量PCR儀校準裝置，大大降低熒光定量/定性PCR儀校準的成本（遠低于同行）；我們開發了細胞計數儀的校準內部規程；開發了細胞復蘇儀的內部校準規程；開發了凝膠電泳掃描儀的校準規程；我們開發了溫度驗證所需要的超低溫和超高溫一體化無線探頭，降低用戶大量使用探頭時的成本，代替了進口；這些例子還有很多，因為我們都是生物出身，所以我們關注每一個生物用戶工藝要求，在生物制藥儀器設備上面專注，“與質量同行、做儀器設備質控"，為了讓生物制藥更安全而努力。

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澤恒.華譜是專注于為生物制藥行業提供實驗室儀器計量校準、儀器設備驗證與驗證/廠房驗證的專業服務商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程部/驗證部/生產部的質控外包服務。